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杂志文章正文
茶皂素的分离纯化方法的初步研究
发布时间:2018-12-03        浏览次数:12        返回列表

湛咏诗 廖华卫 周雄坚

摘  要:目的 研究油茶饼粕中茶皂素的分离纯化方法。方法 采用紫外分光光度法对萃取法、薄层色谱分离法及柱层析法进行跟踪检测。结果 萃取后样品纯度35%,薄层板制备后样品纯度60%,柱层析后样品纯度86%。结论 茶皂素的初步研究效果較佳。

关键词:茶皂素  分离纯化  薄层色谱  柱层析

中图分类号:Q946    文献标识码:A 文章编号:1672-3791(2019)10(a)-0032-02

Abstract: Objective: To study the separation and purification of tea saponin from Camellia oleifera. Methods:Ultraviolet spectrophotometry was used to detect the extraction method, thin layer chromatography and column chromatography. Results:The purity of the sample after extraction was 35%. The purity of the sample after preparation of the thin layer plate was 60%, and the purity of the sample after column chromatography was 86%. Conclusion: The preliminary study of tea saponin has better effect.

Key Words: Tea saponin; Separation and purification; Thin layer chromatography; Column chromatography

油茶籽榨取茶油后剩下的渣饼即为油茶饼粕,是茶油生产的下脚料茶皂素又名茶皂甙,是一种优良的非离子型天然表面活性剂,具有溶血、抗菌、抗病毒、抗应激、降血脂等多种生理活性,可广泛应用于日化、医药、食品和农药等行业。茶皂素是一类结构相似的齐墩果烷型三萜类皂苷混合物,其单体结构称为茶皂苷,由皂苷元、糖体、有机酸(或糖醛酸)3个部分组成。茶皂素为乳白色或淡黄色无定形粉末,平均分子式为 C57H90O26,相对分子量为1200~2800左右,熔点223℃~224℃,是一种非离子型极性物质[1],该实验采取萃取、TLC色谱法、柱层析法等分离纯化方法,为建立茶皂素的分离纯化方法提供参考依据。

1  仪器与试剂

仪器:紫外可见分光光度计UV-6100S。

试剂:硫酸、香草醛、无水乙醇、乙酸乙酯、正丁醇等均为分析纯茶皂素对照品(B20145,上海源叶生物科技有限公司)

2  方法与结果

2.1 油茶枯预处理及茶皂素的提取

2.1.1 油茶枯预处理

取油茶枯1kg,粉碎,于60℃条件下干燥4h,控制水分<5%,粉碎过60目筛,然后加一定量的石油醚(30~60),经索氏抽提至提取液无色,除去油脂。将除去油脂后的茶籽粕置于通风良好处使其自然风干,然后放入60℃烘干,备用。

2.1.2 茶皂素的提取

取2.1.1中油茶枯预处理好的样品100g置于2000mL的三角瓶中,按1∶10的比例加入50%乙醇,超声波提取,每次2h,提取3次。抽滤,滤液合并,回收乙醇,滤液水浴浓缩至200g即可(备用)。

2.2 茶皂素含量测定方法

2.2.1 标准曲线

取一个20mL容量瓶准确配制浓度2mg/mt的茶皂素标准溶液备用,用移液枪精确移取茶皂素标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL,分别放置于5个比色管中,并加水至溶液体积均为0.5mL。精密加入8%香草醛95%乙醇溶液0.5mL,将比色管置于冰水混合物中,移取77%的浓硫酸4mL加入比色管中,振荡后于60℃的水浴锅中水浴15min,然后将比色管放置于冰水混合物中反应10min,取出放置至室温,以试剂空白为对照,在其最大吸收波长550nm处测定其吸光度,以吸光度A为纵坐标,茶皂素标准溶液的浓度c(mg/mL)为横坐标,得到线性标准方程。

2.2.2 含量测定

取提取液0.5mL,置于比色管中,精密加入8%香草醛乙醇溶液0.5mL,将比色管置于冰水混合物中,移取77%的浓硫酸4mL加入比色管中,振荡后于60℃的水浴锅中水浴15min,然后将比色管放置于冰水混合物中反应10min,取出使其恢复室温,以试剂空白为对照,在其最大吸收波长550nm处测定其吸光度[2],依据2.2.1标准曲线计算含量。

2.3 样品液的萃取

将上述溶液置于1000mL的分液漏斗中,先用石油醚(60~90)萃取,每次200mL,共3次,合并萃取液,浓缩(备用)。再用乙酸乙酯萃取,每次200mL,共3次,合并萃取液,浓缩(备用)。最后用正丁醇萃取,每次200mL,共3次,合并萃取液,浓缩至干(备用)。

2.4 TLC色谱法

将上述正丁醇萃取部位的样品用热乙醇溶解,每次30mL,共3次,合并溶液。浓缩转移至10mL容量瓶中作为样品溶液(备用)。将样品溶液点于已活化好的10cmx10cm的薄层板上,在1.5cm处带状点样,在相应的位置点茶皂素对照品溶液,以乙酸乙酯-乙醇(1∶4)为展开剂展开,展开至约8.5cm处即可,取出,晾干,碘熏显色,用铅笔做好记号,取出,记号范围适当扩大,将吸附有样品的吸附剂按色带的位置刮下,收集好,置于层析柱上,用热乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩至10mL(备用)。

2.5 柱层析分离纯化

将10g柱层析硅胶(100~200目)加入到上述溶液中,置于蒸发皿中,搅拌均匀,水浴蒸干,80℃烘干,备用。称取300g已经活化好的柱层析硅胶(100~200目),以乙酸乙酯-乙醇(4∶1)装柱,装好柱后用洗脱剂洗脱一天,干法上样,上好样品后在硅胶上加一团脱脂棉,打开活塞,进行洗脱,收集流份,每瓶约20mL,薄层色谱检测,合并茶皂素流份,回收洗脱剂,水浴蒸干,热乙醇适量溶解,滤过,放冷析晶。滤过,收集结晶,烘干,依样品测定方法测定含量。滤液也依样品测定方法测定含量。观察各自的含量情况,从而为摸索一个更好地分离纯化方法提供参考。

3  讨论

此次实验摸索了茶皂素的分离纯化方法,每一步都进行了跟踪检测,总体了解了茶皂素的占比情况,为以后进一步的研究提供技术支撑。此次实验可操作性强,容易学习领会,通俗易懂,萃取过程中,通过收集3种萃取溶液,分别跟踪检测,得到乙酸乙酯部位茶皂素占比约10%,正丁醇部位茶皂素占比约71%,剩余母液茶皂素占比约6%;薄层色谱制备中,展开系统选择很重要,层析板铺的好坏也对分离效果影响较大,跟茶皂素相应部位的斑点处刮下后处理得到的茶皂素占比约75%,为了更深入地了解茶皂素的占比情况,斑点之上之下分别检测,之上斑点处刮下的硅胶粉经处理后检测,经检测茶皂素占比约11%,之下斑点处刮下的硅胶粉经处理后检测,经检测茶皂素占比约4%;另外柱层析中,装柱的好坏也是分离效果好坏的较为重要的因素。但回收率偏低,下一步努力的方向。设想如果每一步重复做多一次,估计会提高样品的得率及纯度。

参考文献

[1] 邓桂兰.茶皂素的提取及纯化研究[J].食品研究与开发,2016,37(8):197-204.

[2] 傅春玲,洪奇华,阮辉,等.茶皂素定量测定方法的研究[J].杭州大学学报:自然科学版,1997,24(3):240-242.